RESUMO
The global demand for natural products from seaweeds has increased worldwide; however, no description of the use of isoamly alcohol (IAA) for obtaining of sulfated polysaccharides (SPs) has been reported. We investigated the efficiency of two precipitation methods (M) in obtaining SPs from the red seaweed Gracilaria cornea. SPs enzymatically isolated were concentrated with cetylpyridinium chloride (M I) or IAA (M II) and extracts were examined with regard to their yield, structural features and in vitro effects on the activated partial thromboplastin time (APTT) using normal human plasma and standard heparin (193 IU mg-1). Yield difference reached 12.99%. Quantitative determination of sulfate was similar between the two methods (Ì´26%), but extracts revealed different pattern on charge density by agarose gel electrophoresis. Whereas both extracts revealed as agarocolloids, alternative M II was also efficient for lipids, proteins and nucleic acids according to the infrared analysis. Extracts had virtually no effect on APPT (1.95 and 2 IU mg-1 for M I and M II, respectively). The results revealed IAA as an alternative solvent for obtaining SPs from the red seaweed G. cornea, depending on the industry' usage criterion.
A demanda global de produtos naturais de algas marinhas tem aumentado mundialmente. Entretanto, a obtenção de polissacarídeos sulfatados (PSs) com álcool isoamílico (AIA) não é relatada. Investigou-se a eficiência de dois métodos (M) de precipitação de PSs da alga marinha vermelha Gracilaria cornea. Os PSs isolados enzimaticamente foram concentrados com cloreto cetilpiridimínio (M I) ou AIA (M II). Os extratos foram examinados, segundo seu rendimento, características estruturais e efeitos in vitro sobre o tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) usando plasma humano normal e heparina padrão (193 UI mg-1). A diferença nos rendimentos foi 12,99% e semelhante determinação quantitativa de sulfato foi obtida entre os métodos (Ì´26%). A eletroforese em gel de agarose revelou diferenças em termos de densidade de cargas entre os extratos. Enquanto ambos os extratos revelaram agarocoloides, o método M II também se mostrou alternativo para lipídios, proteínas e ácidos nucleicos de acordo com a análise de infravermelho. Os extratos praticamente não modificaram o TTPA (1,95 e 2 UI mg-1 para M I e M II, respectivamente). Os resultados revelaram AIA como um solvente alternativo para obtenção de PSs da alga marinha vermelha G. cornea, dependendo do critério de utilização na indústria.
Assuntos
Rodófitas , Alga MarinhaRESUMO
Studies on macromolecules isolated from marine algae suggested sulfated polysaccharides (SPs) as possible molecular markers for species. We evaluated isolated and fractionated SPs from the green marine algae Caulerpa cupressoides, C. prolifera and C. racemosa collected at Pacheco Beach, as possible taxonomic molecular indicators. Total SPs were extracted with papain in 100 mM sodium acetate buffer (pH 5.0) containing cysteine and EDTA (both 5 mM), followed by ion-exchange chromatography on DEAE-cellulose using a NaCl gradient. The obtained fractions were analyzed by 0.5% agarose gel electrophoresis. Anticoagulant assays employing normal human plasma and standard heparin (193 IU mg-1) by the activated partial thromboplastin time (APTT) test were also performed as comparison parameters. Low yields, and similar chromatographic profiles were found among species' SPs, but electrophoresis revealed distinct SPs resolution patterns. The changes in APTT of SP fractions were dependent on charge density as showed by electrophoresis profiles. Activities were 17.37 (C. cupressoides), 22.17 (C. racemosa) and 25.64 (C. prolifera) IU mg-1, respectively, similar to a previous study using the first and second species. The results suggest that comparative studies of SPs isolated from seaweeds may be an important tool for the identification of Caulerpaceae.
A utilização de macromoléculas isoladas de organismos marinhos sugere correlacionar características em estudos taxonômicos e a investigação comparativa de polissacarídeos sulfatados (PSs) de algas despertam seu interesse como marcadores moleculares. Objetivou-se avaliar PSs isolados e fracionados das algas marinhas verdes Caulerpa cupressoides, C. prolifera e C. racemosa, coletadas na Praia do Pacheco, Estado do Ceará, como possíveis indicadores moleculares taxonômicos. Os PSs totais foram extraídos com papaína em tampão acetato de sódio 100 mM (pH 5,0) contendo cisteína e EDTA (ambos 5 mM), seguido por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose utilizando um gradiente de NaCl. As frações obtidas foram analisadas por eletroforese em gel de agarose a 0,5%. Ensaios anticoagulantes, utilizando o teste do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) com plasma humano normal e heparina padrão (193 UI mg-1), também foram realizados como parâmetros de comparação. Verificaram-se baixos rendimentos e semelhantes perfis cromatográficos entre os PSs das espécies, porém revelando, por eletroforese, diferenças moleculares marcantes. As alterações no TTPA das frações de PS foram dependentes da densidade de cargas negativas mostradas nos perfis eletroforéticos, cujas atividades foram 17,37 (C. cupressoides), 22,17 (C. racemosa) e 25,64 (C. prolifera) UI mg-1, respectivamente, e tal propriedade justificou um estudo já realizado utilizando a primeira e segunda espécies. Os resultados sugerem que estudos comparativos de PSs isolados de algas marinhas possam vir a ser uma ferramenta importante na identificação de Caulerpaceae.
Assuntos
Ativador de Plasminogênio Tecidual , ClorófitasRESUMO
O Brasil abriga uma das maiores biodiversidades marinhas do mundo, favorecendo a descoberta de fontes alternativas de compostos farmacológicos. Desta forma, objetivou-se avaliar o potencial anticoagulante de glicosaminoglicanos (GAGs) isolados das peles da palombeta (Chloroscombrus chrysurus) e guaiúba (Ocyurus chrysurus). Os GAGs foram extraídos com papaína bruta em tampão acetato de sódio 0,1 M (pH 5,0) contendo cisteína 5 mM e EDTA 5 mM, seguido por cromatografia de troca iônica do extrato total em coluna de DEAE-celulose. As frações obtidas foram analisadas quanto à composição química (proteínas contaminantes e carboidratos totais) e os GAGs identificados por eletroforese em gel de agarose a 0,5%. Os ensaios de atividade anticoagulante foram realizados por meio do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA) usando plasma humano normal e heparina-padrão (193,00 UI mg-1). O procedimento de obtenção e fracionamento dos GAGs mostrou-se eficiente, indicando semelhantes perfis cromatográficos entre as espécies avaliadas e, revelando para C. chrysurus, bandas com mobilidades semelhantes ao dermatam sulfato e com atividade de apenas 3,30 UI mg-1.
A great number of pharmacological compounds is found in the Brazilian marine diversity. This study evaluated the anticoagulant potential of glycosaminoglycans (GAGs) isolated from the skin of 'palombeta' Chloroscombrus chrysurus and 'guaiúba' Ocyurus chrysurus. GAGs were extracted with crude papain in 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0) containing 5 mM cysteine and 5 mM EDTA, followed by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose column. The chemical composition (contaminant proteins and total carbohydrates) and the analysis by 0.5% agarose gel electrophoresis of fractions were also determined. Anticoagulant assays were performed by activated partial thromboplastin time (APTT) using normal human plasma and standard heparin (193.00 IU mg-1). The obtaining and fractionation procedures of GAGs were effective and similar chromatographic profiles were verified between the species. A similar mobility to dermatan sulfate was revealed for C. chrysurus. This GAG also showed a low activity of 3.30 IU mg-1.
